友康病毒采樣管技術(shù)優(yōu)勢(shì)大比拼——第四彈……

前言：

前文我們聊過，病毒采樣管不是一款簡(jiǎn)單的產(chǎn)品，其中的采樣液屬于配方產(chǎn)品，各類組分不同濃度的搭配才能保證其性能與穩(wěn)定性。一款好的滅活型病毒采樣液，首先不應(yīng)干擾到最后環(huán)節(jié)的核酸檢測(cè)（避免假陰性）。之前也提到過，高濃度的胍鹽，可有效滅活病毒、保存核酸。但是胍鹽濃度過高可能會(huì)導(dǎo)致提取病毒核酸的過程中胍鹽去除不完全，殘留的胍鹽會(huì)抑制PCR體系中反轉(zhuǎn)錄酶和聚合酶的活性，從而抑制了PCR反應(yīng)，會(huì)導(dǎo)致核酸檢測(cè)結(jié)果呈現(xiàn)為“假陰性”。

而病毒采樣液承載著病毒樣本運(yùn)輸?shù)淖饔?，?yīng)能確保保存在其中的核酸能夠存放更長時(shí)間而不降解。我們采樣完成后往往不會(huì)立即進(jìn)行檢測(cè)，而是要再經(jīng)過一系列的運(yùn)送，這個(gè)過程中若采樣液配方不當(dāng)，便容易使核酸降解，繼而造成“假陰性”的漏檢后果。

于是我們做了以下實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證，探究——友康滅活型采樣管是否能保證運(yùn)輸過程中病毒核酸穩(wěn)定性？

1、 實(shí)驗(yàn)依據(jù)

對(duì)于病毒采樣產(chǎn)品來說，其最重要的一項(xiàng)功能是保持病毒核酸穩(wěn)定，以保證采樣后核酸檢測(cè)結(jié)果的準(zhǔn)確性。如果病毒的核酸不能在采樣液中完好保存，產(chǎn)生降解，會(huì)導(dǎo)致后期核酸檢測(cè)，Ct值偏大，最嚴(yán)重的后果是造成檢測(cè)結(jié)果的假陰性，即漏檢。

2、 實(shí)驗(yàn)?zāi)康?/strong>

探究病毒在友康生物病毒采樣液中（友康滅活型病毒采樣液、A品牌滅活型病毒采樣液）長期放置的核酸檢測(cè)Ct值有無變化。

3、 實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)

1）分別用友康生物MT0501滅活型采樣液與A品牌滅活型病毒采樣液對(duì)比處理檢測(cè)。

2）病毒樣本設(shè)置高、低兩個(gè)濃度。

3）核酸提取時(shí)間分別為0h、24h、48h、7天，依次檢測(cè)各個(gè)時(shí)間點(diǎn)的核酸。

4、 實(shí)驗(yàn)操作

1）配制高、低兩個(gè)濃度的病毒液。

采用友康生物病毒分離無血清培養(yǎng)基對(duì)病毒原液進(jìn)行稀釋，得到高、低兩個(gè)濃度的病毒液。高濃度病毒液濃度為105 copies/mL，低濃度病毒液濃度為104  copies/mL。

2）上述高低兩種病毒液分別加入1：1的唾液樣本，混勻。

取各組采樣液：MT0501滅活型采樣液與A品牌滅活型病毒采樣液900μL，與100μL高低兩種病毒液分別于EP管中混勻，室溫避光。

3）免裂解核酸提?。ù胖榉ǎ?/p>

a.以上得到的病毒混合液分別取150μL加入至150μL滅活型病毒采樣液中進(jìn)行充分混勻，混勻后室溫下放置10分鐘后再進(jìn)行下一步。

向上面的各組EP管中分別加入300μL異丙醇。

b.先混勻磁珠懸浮混合液，再分別加入20μL，渦旋混勻，室溫5min。

c.在磁力架上磁分離，上下顛倒使磁珠充分聚集，棄液體。

d.取下離心管，加入800μL純化液，渦旋混勻，上架，棄凈液體。

e.取下離心管，加入100μL洗脫液，吹吸混勻，室溫孵育3min。

f.上磁力架，吸取液體（核酸溶液）于新的離心管中。

4）新提取得到的核酸溶液進(jìn)行熒光定量PCR。

5、 實(shí)驗(yàn)結(jié)果

1）各組擴(kuò)增曲線及統(tǒng)計(jì)的Ct值。

滅活型病毒采樣液檢測(cè)對(duì)比數(shù)據(jù)：

6、 實(shí)驗(yàn)結(jié)論

1）采用友康生物滅活型病毒采樣管采集到的樣本，在48小時(shí)以內(nèi)，核酸檢測(cè)Ct值無顯著變化，7天內(nèi)Ct值不超過5%，核酸分解不超過5%。核酸保持穩(wěn)定，完全可以滿足現(xiàn)實(shí)病毒采樣與檢測(cè)的需求。

2）對(duì)照A、B品牌的病毒采樣管在一周內(nèi)波動(dòng)較大，甚至出現(xiàn)了假陰性的實(shí)驗(yàn)結(jié)果。