深挖友康NK無血清培養(yǎng)基——細胞功能檢測第二彈

上期文章我們展示了使用友康純因子無血清培養(yǎng)基培養(yǎng)出的NK細胞對K562的殺傷能力。實驗結果表明，當以0.5:1, 1:1, and 2:1的效靶比混入NK細胞孵育4h后，K562細胞的殺傷數(shù)分別為2.53E+04、2.99E+04、3.91E+04，殺傷率分別為51%、60%、78%。

可見經(jīng)友康體系培養(yǎng)的NK細胞具備正常且有效的對K562細胞殺傷效果。

此外，NK細胞的殺傷效果也可通過NK細胞脫顆粒能力，即CD107a的表達來檢測。NK細胞被稱為大顆粒淋巴細胞，其胞漿內含有高濃度以囊泡形式存在的細胞毒性顆粒，如穿孔素、顆粒酶等。溶酶體相關膜蛋白-1 CD107為細胞脫顆粒的標志物，在MHC缺失靶點的刺激下，CD107a的表達與NK細胞介導的靶細胞裂解相關，CD107a的陽性率應當有顯著上調。

此外，除了在幾乎所有分泌細胞因子的細胞上協(xié)同表達外，CD107a也在刺激后不分泌細胞因子的大部分NK細胞上表達。這些數(shù)據(jù)表明，使用CD107a作為NK細胞功能活性的標志物，可以代表具有殺傷活性的NK細胞。

檢測步驟

1. K562細胞離心后，用不含有IL-2和血漿的NK培養(yǎng)基重懸細胞，每孔種2E4個細胞。

2. NK細胞離心后，用不含有IL-2和血漿的NK培養(yǎng)基重懸細胞，按照E:T為2.5：1、1：1分別每孔添加相應量的NK細胞。

3. 分別在2H和4H的時候進行熒光顯微鏡拍照、流式檢測CD107a的表達量

NK細胞毒性的計算方法=加靶細胞刺激的 CD107a 陽性率(%)-CD107a自發(fā)表達率 (%)

檢測結果

1：鏡下觀察

2：流式檢測

樣本一：孵育2h

樣本二：孵育4h

實驗結論

在不同的效靶比下，CD107a均能夠正常表達。隨著NK與K562細胞孵育時間的延長，CD107a的表達量有明顯上調?？梢娪芽刁w系培養(yǎng)的NK細胞有正常且有效的脫顆粒能力。